C 52 GBZ 中華人民共和國(guó)國(guó)家職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) GBZ/T 160.81 －2004 ———————————————————————— 工作場(chǎng)所空氣中 生物類化合物的測(cè)定方法 Methods for d etermination of biological compounds in the air of workplace 2004 年 5月 21 日發(fā)布 2004 年 12 月 1日實(shí)施 ———————————————————————— 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部 發(fā)布 GBZ/T 160.81 －2004 前 言 為貫徹執(zhí)行《工業(yè)企業(yè)設(shè)計(jì)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》 （GBZ 1 ）和《工作場(chǎng)所有害因素職業(yè)接觸限值》（ GBZ 2 ）， 特制定本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)是為工作場(chǎng)所有害因素職業(yè)接觸限值配套的監(jiān)測(cè)方法 ，用于監(jiān)測(cè)工作場(chǎng)所空 氣中生物類化合物 [ 包括 洗衣粉酶等 ] 的濃度。 本標(biāo)準(zhǔn)從 2004 年12 月1 日起實(shí)施。 本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)提出。 本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部批準(zhǔn)。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：上海醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：梁友信等。 GBZ/T 160.81 － 2004 工作場(chǎng)所空氣中 生物類化合物的測(cè)定方法 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了監(jiān)測(cè)工作場(chǎng)所空氣中生物類化合物濃度的方法 。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于工作場(chǎng)所空氣中生物類化合物 濃度的測(cè)定。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中 的條款，通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后 所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議 的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 GBZ 159 工作場(chǎng)所空氣中有害物質(zhì)監(jiān)測(cè)的采樣規(guī)范 3 含酶洗衣粉中酶的抗體結(jié)合 — 比色法 3.1 原理 空氣中 含酶洗衣粉粉塵中的酶用玻璃纖維濾紙采集，洗脫后，與包被在酶標(biāo)板上的特異性抗體 （ Ab1 ）結(jié)合，然后加入特異性抗體（ Ab2 ），最后與一連有標(biāo)記物的 抗體（Ab3 ）結(jié)合，再與顯色 劑反應(yīng)生成有色化合物，比色定量。 3.2 儀器 3.2.1 玻璃纖維濾紙。 3.2.2 采樣夾，濾料直徑 40mm 。 3.2.3 小型塑料采樣夾，濾料直徑 25mm 。 3.2.4 空氣采樣器，流量 0 ～ 10L/min 。 3.2.5 燒杯， 50ml 。 3.2.6 酶標(biāo)板和酶標(biāo)板蓋。 3.2.7 多孔道微量加樣器。 3.2.8 可調(diào)微量加樣器。 3.2.9 恒溫箱。 3.2.10 離心管， 25ml 。 3.2.11 具塞試管， 10ml 。 3.2.12 酶標(biāo)儀。 3.3 試劑 實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。所有試劑于冰箱保存。 3.3.1 抗體包被緩沖液， pH ＝9.6 ±0.2 ：稱取 1.51g 碳酸鈉和 2.93g 碳酸氫鈉，溶于 1000ml 水中。可 保存 2 個(gè)月。 3.3.2 洗板液：稱取 29 .22g 氯化鈉、 1.86g Tris 和1.0g 牛血清白蛋白 (BSA) ，溶于 1000ml 水中，用鹽 酸溶液 ( 6mol/L ) 調(diào) pH 至8.0 ，加入 0.5ml 吐溫20 ，混勻，可保存 1 周。 3.3.3 檸檬酸 - 磷酸緩沖液， pH ＝5.0 ±0.2 ：稱取 7.30g 檸檬酸和 23.87g 磷酸氫二鈉 (Na 2HPO 4·12H 2O) 溶于 1000ml 水中，可保存 1 個(gè)月。 5.4 BSA 封閉液： 2.0g BSA 溶于100ml 洗板液中。 3.3.5 樣品萃取液：稱取 29. 22g 氯化鈉、 0.93g Tris 、4.96g 硫代硫酸鈉 (Na 2S2SO 3·5H 2O) 和0.147g 氯 化鈣 (CaCl 2·2H 2O) ，溶于約 800ml 水中，加入 1.0g BSA ，溶解后，用鹽酸溶液 ( 6mol/L ) 調(diào) pH 至8.0 ， 轉(zhuǎn)移到 1000ml 容量瓶中，定容后加入 1.0ml 吐溫20 ，混勻，可保存 1 周。 3.3.6 鄰苯二胺（ OPD ）溶液， pH ＝5.0 ：稱取 8.0mg OPD ，置于50ml 棕色瓶中，加入 15ml 檸檬酸 - 磷酸緩沖液 ，溶解后，加入 5 µ l 過氧化氫 (30 ％) ，混勻。臨用前配制。若溶液變黃，應(yīng)重新配制。 3.3.7 兔抗體包被溶液：用 10ml 抗體包被緩沖液稀釋 10 µl 兔抗血清，混勻。 3.3.8 豚鼠抗體：用 10ml 洗板液稀釋 10 µl 豚鼠抗體，混勻。 3.3.9 標(biāo)有過氧化物酶的兔抗豚鼠抗體：用 10ml 洗板液稀釋 10 µl 標(biāo)有過氧化物酶的兔抗豚鼠抗體， 混勻。 3.3.10 硫酸溶液， 1mol/L ：將55.5ml 硫酸( ρ 20＝ 1.84g/ml ) 慢慢加入 900ml 水中，混勻。 3.4 樣品的采集、運(yùn)輸和保存 現(xiàn)場(chǎng)采樣按照 GBZ 159 執(zhí)行。 3.4.1 短時(shí)間采樣：在采樣點(diǎn)，用裝好玻璃纖維濾紙的采樣夾，以 5L/min 流量采集 15min 空氣樣品。 3.4.2 長(zhǎng)時(shí)間采樣：在采樣點(diǎn)，將裝好玻璃纖維濾紙的小型塑料采樣夾，以 1L/min 流量采集 2 ～ 8h 空氣樣品。 3.4.3 個(gè)體采樣：在采樣點(diǎn)，將裝好玻璃纖維濾紙的小型塑料采樣夾佩戴在采樣對(duì)象的前胸上部，以 1L/min 流量采集 2 ～ 8h 空氣樣品。 采樣后，將玻璃纖維濾紙的接塵面朝里對(duì)折 2 次，放入清潔的塑料袋或紙袋中運(yùn)輸和保存。 3.5 分析步驟 3.5.1